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CCD841CON人正常結腸上皮細胞
細胞介紹
CCD 841 CoN (ATCC CRL-1790) 細胞是拉伸的上皮樣細胞,在培養中生長為扁平且雜亂無章的層。可以觀察到一些圓形細胞堆積在附著的群體上,碎片中等至重。CRL-1790 是一種正常的人類二倍體細胞系,因此它最終會衰老。人口倍增水平 (PDL) 信息可在特定批次的分析證書上找到,并可在 ATCC 網站上找到。
細胞特性
1) 來源:女性 大腸
2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長(貼壁弱,消化時間短,時間過長會導致細胞不長)
3) 含量:>1x10^6 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
CCD841CON人正常結腸上皮細胞
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的*培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備DMEM 基礎培養基 (0001),特級胎牛血清10 % P/S 1%
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。換液頻率:隔天換液。
3) 凍存液:90%FBS,10%DMSO,現用現配。
注意:
1.細胞經過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片,是正常現象。貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,1000rpm(約150g)離心3-5min,棄上清。加5ml PBS重懸細胞,再1000rpm(約150g)離心3-5min,用新鮮的*培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
2.細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
細胞生長緩慢時,可以選擇更換優質胎牛血清或者提高血清濃度(最高不超過20%)培養,也可以根據細胞生長狀態,選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。
二. 細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,置于37℃培養箱中消化1分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,具體以細胞消化到相互分離但未脫落,輕敲幾下可以下來為準,嚴禁消化到細胞*漂浮,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。